.
A beleza dos estudos de imagem ao vivo é que o espécime está vivo, permitindo que dinâmicas como divisão celular e desenvolvimento embrionário sejam registradas ao longo do tempo.
No entanto, a frustração dos estudos de imagens ao vivo é que o espécime está vivo – contorcendo-se, torcendo-se, escapando do campo de visão. Além disso, é delicado, suscetível a danos causados pelo calor ou morte do próprio equipamento de imagem.
Uma solução técnica para esse dilema surgiu recentemente no curso de Embriologia do MBL, em “um exemplo clássico do esforço colaborativo aqui no MBL”, diz Carsten Wolff, especialista em pesquisa de imagens do MBL.
“Durante o curso de Embriologia de 2021, começamos a desenvolver uma técnica que nos permite fazer imagens de adultos C. elegans worms por longos períodos de tempo e em alta resolução, usando microscopia de folha de luz”, diz Wolff. é publicado este mês em Fronteiras em Biologia Celular e do Desenvolvimento.
O nematoide C. elegans é um organismo popular na pesquisa biológica e biomédica. A microscopia de fluorescência de folha de luz (LSFM) tem sido muito bem sucedida na captura de processos embrionários em C. elegans, bem como em camundongos e peixes-zebra. Mas uma vez que os organismos eclodem, o LSFM apresenta limitações.
Dentro C. elegans, a dificuldade tinha sido a montagem da amostra. Devido às suas propriedades ópticas, o ágar de baixo ponto de fusão funciona bem como um meio de amostra para organismos maiores, mas as pequenas lombrigas tendem a se enterrar no ágar macio e desaparecer. Consequentemente, antes deste protocolo, o maior tempo de imagem LSFM para adultos C. elegans foram 20 minutos. O novo protocolo estende esse tempo para mais de duas horas, evitando o estresse térmico na amostra.
“A inovação que descrevemos é essencialmente uma combinação de duas abordagens de montagem conhecidas”, diz Wolff. “Um é um biopolímero que é viscoso durante a preparação da amostra, mas uma vez exposto à luz UV, ele endurece e mantém a amostra (neste caso, C. elegans) imóvel. A segunda parte é um método de montagem em tubos plásticos que permite o uso de microscopia de folha de luz. A combinação permite uma imagem ao vivo de um adulto C. elegans por um período de mais de 2 horas. Parece um período de tempo curto, mas devido a problemas anteriores com a imobilização do espécime, isso não foi possível. Além disso, imagens de diferentes ângulos, que o LSFM permite, não eram possíveis antes por causa do movimento constante do corpo do espécime.”
A equipe usou o protocolo para a imagem de timelapse dos dendritos de um neurônio sensorial ramificando e podando. E eles esperam que isso permita melhores estudos de imagens ao vivo de outros processos celulares e de desenvolvimento importantes, como biologia de células-tronco germinativas, migração celular, divisão celular e invasão celular. O protocolo é generalizável para trabalhar com outros organismos, com pouca ou nenhuma modificação.
Além de Wollf, os co-autores são o assistente de ensino do curso de Embriologia da MBL Jayson J. Smith, pós-doc na Universidade de Chicago; a assistente de ensino do curso Isabel Kenny, doutoranda na Duke University; David Matus da Stony Brook University; o diretor do curso, David Sherwood, da Duke University; o investigador da MBL e cientista da CZI Abhishek Kumar; e a assistente de pesquisa do MBL, Rachel Cray.
Outros participantes do curso de embriologia, o aquarista sênior do MBL Jonathan Henry e a equipe do Centro de Microscopia Central do MBL são reconhecidos por sua assistência.
Fonte da história:
Materiais fornecidos por Laboratório Biológico Marinho. Original escrito por Diana Kenney. Nota: O conteúdo pode ser editado para estilo e duração.
.
