.
Um estudo recente de pesquisadores japoneses, publicado online em Espectro de Microbiologia em 6 de julho de 2023, agora deu a resposta. Usando células B primárias de doadores saudáveis em vez de linhagens de células, a equipe descobriu a maquinaria genética responsável por induzir a transformação do crescimento após a infecção por EBV. Explicando a lógica por trás do estudo, o investigador principal Prof. Takayuki Murata comentou: “Os insights da pesquisa de EBV que usam linhas de células foram limitados, porque as linhas de células já estão em um estado imortalizado. Para superar esse obstáculo, usamos células B primárias de doadores saudáveis e as infectamos com EBV. Isso nos permitiu monitorar a transformação de crescimento passo a passo das células B e analisar os mecanismos envolvidos.”
A primeira etapa envolveu a observação cuidadosa de células B primárias infectadas com EBV de tipo selvagem usando microscopia eletrônica e imunocoloração. Já dois dias após a infecção, a morfologia das células B mostrou alterações significativas. Observou-se aumento do nucléolo (região dentro do núcleo que produz os ribossomos, o maquinário de produção de proteínas da célula) e aumento do número de nucléolos. Curiosamente, o aumento nucleolar foi seguido por um aumento de ambos – os núcleos e as células.
Para entender as alterações transcricionais que ocorreram nas células B infectadas, foi realizado o sequenciamento do RNA. “Entre os genes que apresentam níveis de expressão significativamente alterados, um denominado IMPDH2 se destacou, pois já havia sido associado a alterações morfológicas semelhantes no glioblastoma (outro tipo de câncer). Uma análise cuidadosa mostrou que os níveis de IMPDH2 atingiu o pico dois dias após a infecção – coincidindo com o momento do alargamento nucleolar. Isso sugeriu que estávamos no caminho certo”, explicou o Dr. Atsuko Sugimoto, da Escola de Medicina da Fujita Health University, que também fez parte da equipe de pesquisa.
Curiosamente, mudanças como IMPDH2 a indução e o aumento nucleolar puderam ser vistos quando as células B primárias foram ativadas usando sinais inflamatórios, mesmo na ausência de infecção por EBV. Finalmente, a inibição de IMPDH2 o uso de RNAs silenciadores e da droga ácido micofenólico (MPA) impediu a transformação do crescimento de células B primárias após a infecção por EBV, produzindo nucléolos, núcleos e células menores. Isso confirmou que IMPDH2 indução desempenhou um papel fundamental na transformação do crescimento de células B infectadas por EBV.
A próxima etapa envolveu entender como o EBV ativa IMPDH2 expressão. Três genes virais chave—EBNA2 e LMP1– foram testados devido ao seu papel conhecido na transformação de células B induzida por EBV. Curiosamente, quando o EBV não EBNA2 foi usado para infecção, IMPDH2 indução após infecção primária por EBV foi bloqueada. Este efeito não foi observado com LMP1 suprimir. “Isso demonstrou muito claramente que o EBV induz IMPDH2 expressão via EBNA2–mecanismos dependentes. Além disso, o fator de transcrição celular MYC também esteve envolvido na indução de IMPDH2”, esclareceu o Dr. Sugimoto.
Com várias evidências importantes em seu prato, os pesquisadores finalmente começaram a encontrar a peça final do quebra-cabeça. Para destacar o significado clínico de suas descobertas, eles examinaram se o medicamento micofenolato mofetil (MMF) poderia prevenir a transformação de células B e PTLD. O Prof. Murata elaborou: “Assim como o MPA, que testamos na parte anterior de nosso estudo, o MMF é um IMPDH2 inibidor. Mais importante, o MMF já é um imunossupressor clinicamente aprovado. Por isso, foi útil testar se poderia ser aplicado na prevenção clínica da PTLD.” Como esperado, a administração de MMF em um modelo pré-clínico de xenoenxerto de camundongo levou a uma melhor sobrevida e redução da esplenomegalia (aumento do baço, indicando redução da proliferação de células B). Essas observações confirmaram que o uso de MMF pode inibir o desenvolvimento de PTLD.
Este estudo é o primeiro a demonstrar que IMPDH2 ativação e hipertrofia nucleolar são essenciais para a transformação de células B induzida por EBV e que IMPDH2 inibição pode suprimir PTLD. Isso poderia levar à adoção do MMF como um agente para a prevenção de PTLD EBV-positivo, proporcionando alívio significativo aos pacientes transplantados.
***
Referência
DOI: https://doi.org/10.1128/spectrum.00440-23
Sobre a Universidade de Saúde Fujita
A Fujita Health University é uma universidade particular situada em Toyoake, Aichi, Japão. Foi fundado em 1964 e abriga um dos maiores hospitais universitários universitários do Japão em termos de número de leitos. Com mais de 900 membros do corpo docente, a universidade está empenhada em oferecer várias oportunidades acadêmicas para estudantes internacionalmente. A Fujita Health University foi classificada em oitavo lugar entre todas as universidades e em segundo lugar entre todas as universidades privadas no Japão no ranking mundial de universidades do Times Higher Education (THE) de 2020. O University Impact Rankings 2019 visualizou iniciativas universitárias para objetivos de desenvolvimento sustentável (ODS). Para o ODS “boa saúde e bem-estar”, a Fujita Health University ficou em segundo lugar entre todas as universidades e número um entre as universidades privadas no Japão. A universidade se tornou a primeira universidade japonesa a sediar o “THE Asia Universities Summit” em junho de 2021. A filosofia fundadora da universidade é “Nossa criatividade para o povo (DOKUSOU-ICHIRI)”, que reflete a crença de que, assim como os ex-alunos e ex-alunos, os alunos atuais também desbloqueiam seu futuro, alavancando sua criatividade.
Site: https://www.fujita-hu.ac.jp/en/index.html
Sobre o professor Takayuki Murata da Fujita Health University
O Prof. Takayuki Murata é professor do Departamento de Virologia da Escola de Medicina da Fujita Health University, Japão. Ele completou seu PhD em Ciências Médicas pela Universidade de Nagoya. Ele é um dos principais especialistas nas áreas de pesquisa em virologia e biologia tumoral, com foco no vírus Epstein-Barr, vírus da hepatite B e SARS-CoV-2. Ele é membro da Sociedade Americana de Microbiologia e da Fujita Medical Society. Em sua longa e ilustre carreira científica, publicou mais de 100 estudos e recebeu diversas bolsas de pesquisa de prestígio.
Informações de financiamento
Este trabalho foi apoiado por subsídios para pesquisa científica do Ministério da Educação, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia (20H03493 para HK), a Sociedade Japonesa para a Promoção da Ciência (22K10520, 21J40038 para AS), o Japão Agency for Medical Research and Development (JP20wm0325012 para TM, TW, YO, YS e HK, bem como JP21wm0325042 para AS, YS, HK e TM), a Takeda Science Foundation (para TM), um Nihon Shinyaku Research Grant (para AS e TM) e o Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute (para HK).
.
